Radio y enzimoinmunoensayos para el factor de crecimiento epidérmico humano con anticuerpos monoclonales de ratón / Radio and enzyme immunoassays for human epidermal growth factor with mouse monoclonal antibodies

Utilizando anticuerpos monoclonales (AcM) de ratón para el factor de cecimiento epidérmico (EGF), hemos construído un radioinmunoensayo de fase sólida (RIA-FS) y dos sistemas ELISA tipo sandwich, para la cuantificación de esta molécula. El RIA-FS está basado en la adsorción del AcM CB-EGF.1 (IgG1) al poliestireno, a 20 *g/ml, y la incubación de las muestras a estudiar con el EGF radioyodado, por 3 horas, a 37-C. La sensibilidad del ensayo es de 2 ng/ml, con coeficientes de variación intra e inter ensayo por debajo de 12 %, para un amplio rango de concentraciones (límite superior de 300 ng/ml). En los ELISA se empleó este mismo AcM, conjugado con peroxidasa, como anticuerpo de revelado, y el CB-EGF.2 (IgG1) en la fase sólida. Si el antígeno y el conjugado se incuban secuencialmente, la sensibilidad del sistema es de 6 ng/ml, pero si ambos son mezclados y aplicados simultáneamente a la fase sólida activa, la sensibilidad del ensayo se incrementa hasta 400 pg/ml. El ELISA "secuencial" demostró una excelente correlación con el RIA-FS para la cuantificación de EGF humano recombinante, en muestras provenientes del proceso de producción y purificación de esta molécula. Ambos sistemas ELISA han sido ensayados en pruebas preliminares para su capacidad de detección de EGF humano en muestras de saliva y orina, arrojando valores que coinciden con datos reportados previamente en la literatura

Anticuerpos monoclonales de ratón contra la proteína gag 24 del Virus de la Inmunodeficiencia Humana Tipo I (VIH-1) / Mouse monoclonal antibodies against the gag 24 protein of the human immunodeficient virus type I (HIV-1)

El desarrollo de sistemas que permiten la cuantificación de la proteína gag 24 del VIH-1 puede ser de importancia en el pronóstico de la evolución de pacientes con SIDA, y en el monitoreo de la producción de antígeno natural y recombinante. En este trabajo se reporta la generación de un panel de anticuerpos monoclonales (AcM), a través de la fusión de esplenocitos de ratones inmunizados con el antígeno recombinante y el mieloma SP2/O/Ag14. Se han caracterizado cinco AcM provenientes de clones secretores estables. La especificidad de los anticuerpos por la gag 24 fue confirmada por ELISA, inmunofluorescencia indirecta y Western Blot. Uno de los cinco AcM reconoce, además, la cepa SBL6669 del VIH-2 en ELISA. Finalmente se demostró que el suero de un individuo infectado con VIH-1 inhibe la unión de AcM 197 a la gag 24 adsorbida a placas de poliestireno

Obtención de un anticuerpo monoclonal que identifica timocitos humanos / Obtention of a monoclonal antibody that identifies human thymocytes

El anticuerpo monoclonal (AcM) IOR-T7, del tipo IgM, es secretado por un hibridoma generado por la inmunización de ratones BALB/c con células de la línea de cultivo CEM y la fusión de los linfocitos esplénicos con el mieloma P3/x63.Ag8.6.5.3. Este AcM no reconoce, o lo hace en muy bajo porcentaje, las poblaciones celulares de la sangre periférica, mientras que identifica el 76 y el 79% de timocitos fetales y pediátricos, respectivamente, y las líneas celulares CEM y Molt-4, de origen T. El antígeno reconocido por este AcM parece estar relacionado con estadios tempranos de la ontogenia de los linfocitos humanos

Características proliferativas de hibridomas B de ratón bajo diferentes condiciones de cultivo: su relación con el tamizaje de factores de crecimiento específicos / Proliferation characteristics of mouse B hybridomas under different culture condition: their relationship with the screening of specific growth factors

Se llevó a cabo la caracterización del crecimiento de varios hibridomas B de ratón, bajo diferentes condiciones de cultivos. Los experimentos de cultivo a alta densidad, clonaje y formación de colonias en medio gelificado con agarosa, empleando combinaciones de suero fetal bovino y sobrenadante de cultivos de células endoteliales humanas, demostraron que este último es capaz de promover el crecimiento a niveles comparables y aun superiores que el inducido por capas de células "alimentadoras". Se determinó que el hibridoma IOR-L1 es dependiente, para su proliferación, de la adición al medio de factores promotores del crecimiento no contenidos, o escasamente representados, en el suero fetal bovino. Sobre la base de estos experimentos se propone un sistema biológico para ser utilizado en el seguimiento de la marcha de purificación de actividades promotoras del crecimiento de hibridomas B

Anticuerpos monoclonales contra el antígeno carcinoembrionario en ensayos inmunohistoquímico e inmunoquimicos / Monoclonal antibodies against carcinoembryonic antigen in immunohistochemical and immunochemical assays

En el presente trabajo se reporta la obtención de cinco clones de hibridomas de ratón, secretores de anticuerpos monoclonales que reconocen una preparación de antígeno carcinoembrionario (CEA). Durante el proceso de tamizaje y selección de estos clones, se empleó fundamentalmente un sistema de radioinmunoensayo, donde se compararon los sobrenadantes de cultivo o los ascitis tumorales con un antisuero policlonal de referencia, con respecto a su enlazamiento y especificidad por 125I-CEA. Los anticuerpos monoclonales seleccionados pertenecen a las clases G y M de inmunoglobulinas de ratón, y dos de ellos manifestaron bajo o ningún reconocimiento del antígeno de reactividad cruzada no específico (NCA). Los anticuerpos IOR-CEA 3 (IgM) e IOR-CEA 5 (IgG1) se estudiaron para su reconocimiento de tejidos fetales humanos, lesiones benignas de la mama, y cánceres de mama, pulmón y colon. El IOR-CEA 3 puede ser utilizado para estudios de confirmación histológica diagnóstica por técnica de inmunofluorescencia indirecta en tejido fresco. Los anticuerpos IOR-CEA 1 (IgG1) e IOR-CEA 2 (IgM) se ensayaron mediante diferentes combinaciones en un sistema ELISA para conocer su capacidad de detectar CEA purificado. Los resultados preliminares indican un adecuado nivel de reconocimiento cuando se utiliza como primer anticuerpo el antisuero policlonal anti-CEA de referencia y el monoclonal IOR-CEA 1 como segundo anticuerpo

IOR-T2: Anticuerpo monoclonal que reconoce un antígeno de diferenciación de las células tímicas, presente en las células tumorales de pacientes con linfomas T cutáneos / IOR-T2: Monoclonal antibody which recognizes a diferentiation antigen of the thymic cells present in tumoral cells of patients with cutaneous T lymphoma

En el presente artículo se reportan las características del reconocimiento del anticuerpo monoclonal (AcM) IOR-T2 sobre células mononucleares normales activadas con Concanavalina A (Con A), células tímicas y líneas celulares de cultivo mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta; además, se realizó la determinación de la subclase de inmunoglobulina y del punto isoeléctrico de este AcM. Los resultados muestran que el AcM IOR-T2 es una IgG2b que no reconoce a los antígenos que se expresan durante el proceso de estimulación con Con A de las células linfoides normales. A diferencia de lo observado en las células mononucleares de la sangre periférica normal, el AcM IOR-T2 reconoce el 59 ñ 3 % de los timocitos fetales y el 16 ñ 3 % de las células de los timos pediátricos. El AcM IOR-T2 parece identificar a un antígeno de diferenciación de las células tímicas, el cual se expresa en un alto porcentaje de las células tumorales de la sangre periférica de pacientes con linfomas T cutáneos

Utilización de líneas celulares de cáncer mamario humano en la obtención de anticuerpos monoclonales que reconocen tejido tumoral / Use of human breast cancer cells for the production of monoclonal antibodies that recognize the tumoral tissue

Trabajos recientes dirigidos a la obtención de anticuerpos monoclonales contra células de cáncer mamario humano, reportan la generación de reactivos potencialmente útiles en la definición del linaje de tumores de origen dudoso, la detección de metástasis ganglionares, la radiolocalización de lesiones, la formación de subgrupos de pacientes con tumores de probable comportamiento biológico diferente y el tratamiento inmunológico del cáncer mamario. En este artículo se describe la obtención de cultivos de hibridomas secretores de anticuerpos que reconocen líneas de cultivo de cáncer mamario humano y tejido tumoral. Estos se generaron mediante la hibridización de células P3/x63-Ag8-653, con células esplénicas de ratones Balb/cHab inmunizados con tres líneas de cáncer mamario humano. En el tamizaje de los anticuerpos y la definición de su reconocimiento tisular se empleó la técnica de inmunofluorescencia indirecta. Se discute el valor de las líneas celulares como inmunógeno, el sistema empleado para el tamizaje de anticuerpos y la caracterización de su reconocimiento, así como la posible relevancia de los patrones de identificación obtenidos en los cortes histológicos de tumores mamarios benignos, malignos y en lesiones metastásicas ganglionares

Estudio sobre el factor de crecimiento epidérmico:III obtención de moléculas EGF equivalentes, a partir del medio condicionado de células L929 / Studies on the epidermal growth factor (EGF):III obtention of EGF-like molecules from L-929 cell culture conditioned medio

El Factor de Crecimiento Epidérmico ha sido recientemente purificado a partir de glándulas submaxilares de ratón y a partir de orina humana. Sin embargo, existen evidencias que indican que los factores de crecimiento liberados por células transformadas en cultivo, aunque reconocen el receptor del factor de crecimiento epidérmico, son moléculas diferentes. Por su capacidad de crecimiento in vitro con poco suplemento de suero, las células L929 son especialmente adecuadas para cultivos en masa. En este trabajo presentamos evidencias de que las células L929, mantenidas en medio sin suero, libran al espacio extracelular moléculas que reconocen el receptor del Factor de Crecimiento Epidérmico. Estas moléculas muestran un peso molecular aparente (en cromatografía de filtración en gel) cercano a 6 000; son estables en medio ácido a temperatura ambiente. Sin embargo, su comportamiento de adsorción en matrices de acrilamida es diferente al del EGF

Obtención de hibridomas de ratón productores de anticuerpos monoclonales que reconocen células humanas de origen T: II. Caracterización de los anticuerpos monoclonales IOR-T1 e IOR-T2 / Obtention of mice hybridomas producing monoclonal antibodies which recognize human T cells: II. Characterization of IOR-T1 and IOR-T2 monoclonal antibodies

Los anticuerpos monoclonales han contribuído de manera particular a la caracterización de las diferentes subpoblaciones celulares del sistema linfoide y han demostrado su utilidad para el diagnóstico, pronóstico y tratamiento de diferentes enfermedades. En el presente trabajo se estudian dos anticuerpos monoclonales: IOR-T1 e IOR-T2, secretados por hibridomas estables obtenidos por la fusión de la línea de mieloma murino P3/x63-Ag8-6.5.3 y células esplénicas de ratones Balb/cHab, inmunizados con células mononucleares periféricas de un paciente con síndrome de Sézary. Las especificidades fueron probadas sobre células mononucleares periféricas de individuos sanos, pacientes con linfomas T cutáneos y pacientes con leucemias, y sobre diferentes líneas celulares de cultivo. Por otra parte se realizaron comparaciones con el anticuerpo monoclonal OKT 3 y con el método de Rosetas-E. Se demostró que el IOR-T1 reconoce específicamente el marcador de las células T humanas y que puede ser utilizado confiablemente para el diagnóstico inmunológico de las leucemias y linfomas. El IOR-T2 parece identificar un antígeno tumor asociado relacionado con alguna de las etapas de la progresión y/o proliferación neoplásica de los linfomas T cutáneos